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空腸彎曲桿菌的鑒定方法

 Park和Sanders研制了一種分離受損彎曲桿菌的選擇性培養(yǎng)基。ISO 10272: 1995標準推薦使用這種培養(yǎng)基分離彎曲桿菌。因為ISO現(xiàn)行方法(1997年版)和英國標準1996修定版所介紹的抗生素混合物的制備方法都不太恰當,目前暫時仍使用Exeter 培養(yǎng)基分離彎曲桿菌,按照Roberts等人(1995)的操作步驟進行操作。Cony等(1995) 對各種不同的增菌、分離培養(yǎng)基的合理性和優(yōu)點進行了詳盡的比較。

 
由于這類培養(yǎng)基成分復雜,制備吋很微小的偏差都會對培養(yǎng)基的性能造成很大的影響,因此,最好使用商品化的脫水培養(yǎng)基和制備好的抗生素補充液。
 
平板置于含5%?10%氧氣、10%二氧化碳和85%?90%氮氣的微需氧環(huán)境中培養(yǎng)。 將厭氧罐(不加催化劑的)部分排空,再注人氮氣-二氧化碳混合氣體至大氣壓,就能很容易地得到這種混合的培養(yǎng)環(huán)境。也可用能安裝在厭氧罐(不含催化劑)上的空氣吸收/發(fā)生袋(如牛津彎曲桿菌袋)或空氣發(fā)生袋(對于不含催化劑的罐)獲得培養(yǎng)環(huán)境(例如牛津彎曲桿菌產(chǎn)氣試劑盒-BR56與3.4L含催化劑的厭氧罐結合使用,或BR60與2.5L含催化劑的厭氧罐結合使用)。
 
檢測步驟
 
1、從生禽肉等樣品中直接分離
 
擦拭小雞的皮膚(尤其是肛門附近的部位)或腹腔,用拭子在Preston血瓊脂平板、 Exeter瓊脂平板或Preston無血頭孢哌酮瓊脂平板的表面劃線接種。置于微需氧環(huán)境中培養(yǎng)血瓊脂或Exeter瓊脂37C培養(yǎng)4h,在42C下培養(yǎng)44?68h; Pre­ston 無血頭孢哌酮瓊脂37T:培養(yǎng)48hc。
 
 
2、冷凍食品增菌
 
(1) 將25g食品混人225mLExeter液體培養(yǎng)基中,用均質(zhì)器混勻。轉(zhuǎn)人到帶螺帽的容器中(罐或瓶),容器頂部的開口要小(有利于保持微需氧環(huán)境),擰緊螺帽,在37:培養(yǎng) 18-48h
 
(2) 轉(zhuǎn)接選擇性瓊脂培養(yǎng)基(如Preston無血頭孢哌酮瓊脂,Exeter瓊脂或Preston血瓊脂)。
 
 
3、驗證
 
用鏡檢觀察法進行彎曲桿菌的驗證(運動、革蘭氏陰性、無孢子、彎曲的s-型的桿狀菌)。另外,彎曲桿菌的過氧化氫酶和氣化酶試驗為陽性。
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