人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(HCCLM3)介紹：
用人肝癌細(xì)胞株MHCC97-H 接種裸鼠，進(jìn)行3 次肺轉(zhuǎn)移篩選，取肺轉(zhuǎn)移瘤建成皮
人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(HCCLM3)特性：
1） 來(lái)源：肝癌
2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，胞質(zhì)內(nèi)有顆粒
3） 含量：>1x106 個(gè)/mL
4） 污染：支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性
5） 規(guī)格：T25 瓶或者1mL 凍存管包裝
運(yùn)輸和保存：可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式：（1）干冰運(yùn)輸，收到后
人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(HCCLM3)用途：僅供科研使用。
人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(HCCLM3)培養(yǎng)步驟:
一．人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞(HCCLM3)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM 培養(yǎng)基(DMEM，GIBCO，貨號(hào)11965-092)；北美胎牛血清(United
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。溫度：37 攝氏度，培養(yǎng)箱
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1） 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加
2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞1-2 次。
2. 加2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM 條件下離心4 分
4. 將細(xì)胞懸液按1：2 到1：5 的比例分到新的含8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者
3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。
下面T25 瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗瓶底1-2 次后加入1ml 胰酶，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml 完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM 離心5 分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO 至最終濃度為
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，至少2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液
注意事項(xiàng)：
1. 收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立
2. 所有動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注
