一、
細(xì)胞培養(yǎng)條件
細(xì)胞英文名稱：3LL
中文名稱：小鼠肺癌細(xì)胞系
生長特性：貼壁
培養(yǎng)體系：DMEM+10%FBS
傳代方法：建議第一次 1:2 傳代
傳代情況：2 天換液
凍存條件：細(xì)胞庫無血清凍存液
備注
收集瓶中培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng)
二、細(xì)胞收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運輸?shù)淖詈棉k法。收到
細(xì)胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)
格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置 2-4 小時。鏡下觀察：未超過 80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)
液收集至離心管中，加入 6ml 完全培養(yǎng)基，放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng)；超過 80%匯合度時，
根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，處理
完后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外
一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入 5mL 培養(yǎng)基
混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 4-6mL 完全培養(yǎng)基后吹勻。然
后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6cm 皿中），培養(yǎng)過夜。第二
天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
2. 加 1-2ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培養(yǎng)箱中消化
1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，
輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加 5ml 以上含 10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在 1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加
1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按 5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按 1：2 到 1：5 的比例分到新的含 5-6 ml 培養(yǎng)液
的新皿中或者瓶中。PS：若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用 75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或
安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm 培養(yǎng)皿，加入 5ml 左右完
全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過 80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，
視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
售后服務(wù)告知書
一、收到細(xì)胞處理方法
1. 收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置若干小時（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)
定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收
細(xì)胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下
細(xì)胞狀態(tài)，100×，200×各一張），觀察記錄細(xì)胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方
進(jìn)行售后的依據(jù)。
2. 收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費重發(fā)一次細(xì)胞。
3. 由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩氐挠绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞
后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后是需出示收到細(xì)胞的時間證明及客戶提供收貨時間和
發(fā)現(xiàn)問題后與客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于 7 天。
4. 如客戶對細(xì)胞的種類、純度、活性等特性有疑問，需提供相應(yīng)的生物學(xué)實驗檢測結(jié)果作
為依據(jù)
