細胞名稱 Mcf-7/ADR；人乳腺癌阿霉素耐藥細胞株
生長特性 貼壁
培養(yǎng)條件 RPMI-1640+10%FBS+1%P/S+500ng/mlADR
培養(yǎng)環(huán)境 37℃ 5% CO2，,95% AIR
傳代比例 1:2 傳代，2~3 天換液
凍存條件 90%FBS+10%DMSO
QC 檢測 支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性
1、細胞傳代：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 完全培養(yǎng) 液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 完全培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
2、細胞凍存：
1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；
2）添加 0.25%胰蛋白酶消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終 止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；
3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；
4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序 降溫盒可直接放入-80℃。
3、細胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié) 晶，然后用 75%的酒精擦拭凍存管外壁； 2）將凍存管中的細胞移至含 6ml 完全培養(yǎng)基的 15ml 離心管中， 1000rpm 離心 5min；
3）棄上清，沉淀用 6ml 完全培養(yǎng)基重懸，接種 25cm2培養(yǎng)瓶，于 37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
